如何溶解多肽?

我们建议在溶解之前用蒸馏水或无菌水进行小试，对于较短的寡肽（小于5aa）常常能够直接溶解。对于其他的多肽，大多需要根据多肽的序列优化溶解条件，并测试几种不同的溶剂，直至找到最优方法（超声处理有助于打碎颗粒，增加溶解度）。

多肽的极性对溶解度有很大的影响：酸性的蛋白易溶解于碱性溶液，而酸性溶液则适合碱性蛋白。

可以用下表氨基酸的酸碱度值的加和来计算多肽的酸碱度：

氨基酸名称 酸碱度赋值

按上述原则，得分大于0为碱性多肽，得分小于0的为酸性多肽，得分为0为中性多肽。

举例说明:

RKDEFILGASRHD: (+5) + (-4) = +1 认为是碱性多肽

EKDEFILGASEHR: (+4) + (-5) = -1 认为是酸性多肽

AKDEFILGASEHR: (+4) + (-4) = 0 认为是中性多肽

1. 对于碱性多肽，如果纯水无法溶解，请尝试10% - 30%的醋酸；如果多肽还是不溶，测试纯醋酸和三氟乙酸TFA(<50 μl)来溶解，然后将多肽溶液稀释到需要的浓度。

2. 对于酸性多肽，如果纯水无法溶解，请尝试13% 氨水（v/v）来溶解，并稀释至所需浓度。如果多肽序列中包含半胱氨酸Cys（C），不能用氨水溶解，需使用二甲基甲酰胺（DMF）或N-甲基吡咯烷酮 (NMP)进行溶解。对于容易聚集的多肽，则选择6M的胍盐酸（guanidine?HCl）或8M的尿素（Urea）来溶解，然后稀释到需要的浓度。

3. 中性多肽应选用机溶剂来溶解。首先，尝试使用乙腈 （acetonitrile） ，或甲醇 （methanol） 或异丙醇 （isopropanol）进行溶解；对于疏水性非常强的多肽，先用少量的二甲基亚砜（DMSO）溶解，并用水稀释到需要的浓度。同理，如果多肽序列中包含半胱氨酸Cys（C），需使用二甲基甲酰胺（DMF）或N-甲基吡咯烷酮 (NMP)进行溶解。对于容易聚集的多肽，则选择6M的胍盐酸（guanidine?HCl）或8M的尿素（Urea）来溶解，然后稀释到需要的浓度。

问: 如何保存多肽?

答: 1. 为了方便储存及后续使用，建议将多肽溶解至浓度为1-2 mg/ml左右。

2. 为了防止或尽量减少多肽降解，请将多肽以冻干粉形式保存在-20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小样存放，以避免反复冻融。一份样品融冻后未用完，应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦，所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。

3. 多肽序列中含有甲硫氨酸Met（M），半胱氨酸Cys（C）或酪氨酸Tyr（Y），建议保存于无氧环境防止氧化。

问: 如何选择适合自己研究的多肽纯度?

答: 粗品肽不推荐用于生物实验。粗肽可能含有大量的非肽类杂质，如残留的有机溶剂、清除剂、TFA和其他不完整肽。TFA不能被完全消除，通常交付的肽以TFA盐的形式存在。如果残留的TFA影响您的实验，我们推荐其他盐形式，如醋酸盐和盐酸盐等。这些盐通常比常规TFA盐贵20-30%以上。这是由于在转化过程中出现更多的肽损失和需要更多的原材料。

NovoPro建议对各种项目采用以下级别的肽纯度：